下面給大家介紹一下用生化培養(yǎng)箱進(jìn)行腐乳產(chǎn)蛋白酶菌株的分離。

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求

了解涂布分離和平板劃線法從食物中分離食源性微生物的原理和方法，并熟練掌握該操作方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

微生物是蛋白酶的合適來(lái)源，與動(dòng)物和植物相比，微生物作為蛋白酶的來(lái)源具有更多生理生化上的*性。微生物來(lái)源的蛋白酶都是胞外酶，易于分離純化，更重要的是微生物易于培養(yǎng)和發(fā)酵，有廣泛的生物化學(xué)多樣性和遺傳操作的感受性。

通過(guò)稀釋涂布法或劃線分離法在選擇性平板上可以對(duì)產(chǎn)蛋白酶菌株進(jìn)行分離。稀釋涂布平板法是一種將菌體按比例制備成若干個(gè)稀釋度，再分別經(jīng)涂棒涂布培養(yǎng)而進(jìn)行微生物分離純化的方法；平板劃線分離法是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過(guò)分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當(dāng)作待分離微生物的“純種”。有時(shí)這種單菌落并非都由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的，故必須反復(fù)分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點(diǎn)到線”稀釋而達(dá)到分離目的的。

根據(jù)透明圈的大小來(lái)篩選目的菌株，透明圈越大的菌具有較強(qiáng)的產(chǎn)酶能力。對(duì)分離到的菌株進(jìn)行純化，得到高產(chǎn)蛋白酶菌株。

三、試驗(yàn)材料

1、材料與試劑

豆腐乳：市購(gòu)豆腐乳

2、主要儀器與設(shè)備

無(wú)菌操作箱、恒溫水浴鍋、生化培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、振蕩培養(yǎng)箱

四、實(shí)驗(yàn)步驟與方法

1、培養(yǎng)基的制備

可溶性淀粉1%、酵母膏0.5%、酪蛋白1%、KH2PO40.1%、MgSO40.02%、瓊脂2.0%,pH值為中性.

配制方法:稱取酪蛋白1.0g,先用少量2%NaOH潤(rùn)濕,玻棒攪動(dòng),再加適量的蒸餾水,在沸水浴中加熱并攪拌,至*溶解,補(bǔ)足水量至100mL,加入其他成分,調(diào)整pH,滅菌備用。

2、菌株純化分離(涂布法和劃線法每組選一種方法進(jìn)行操作)

（1）稀釋法分離:采用無(wú)菌水,10倍梯度稀釋豆腐乳的菌懸液到10^8，吸取10^6到10^8梯度的菌懸液各1mL，注入初篩培養(yǎng)基平板中,每個(gè)梯度做2個(gè)平行平板,涂布均勻。將涂布后的平板置于28℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。

(2)劃線分離:對(duì)豆腐乳菌懸液(取1mL豆腐乳汁加入10mL無(wú)菌水制成)劃線分離,制作兩個(gè)劃線分離平板,將平板置于28℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。